基因型：

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1

簡(jiǎn)要說(shuō)明：

DH5α菌株是實(shí)驗(yàn)室常用的感受態(tài)細(xì)胞。 缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍(lán)、白斑篩選。DH5α菌株的缺點(diǎn)是生長(zhǎng)緩慢，37℃需培12-14小時(shí)才能看見(jiàn)克?。蝗缧杓涌煸囼?yàn)速度，請(qǐng)選用TG1，Mach1-T1，XL10-Gold等生長(zhǎng)速度快的感受態(tài)細(xì)胞。High5TM系列DH5α感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率約1×109cfu/μg。

操作說(shuō)明：

1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手?jǐn)嚧駿P管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少17h。

注意事項(xiàng)：

1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后8分鐘內(nèi)加入質(zhì)粒,否則會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。

2.混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。