JM110 Chemically Competent Cell

基因型：

rpsL (StrR) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsxdam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proABlacIqlacZΔM15]

簡要說明：

JM110菌株具有硫酸-(StrR)  LIAN霉素抗性(StrR) ；是甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株，提取得到的質粒DNA，可被對dam、dcm甲基化敏感的內切酶切割； lacIqlacZΔM15的存在使JM110可以進行藍白斑篩選，但轉化效率不高  High5TM系列JM110感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，經pUC19 質粒檢測轉化效率約107 cfu/μg。一般不用于質粒構建，只適用于質粒轉化。

操作說明：

1.JM110感受態(tài)細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中），加入目的DNA并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項：

1.感受態(tài)細胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后不可久放，八分鐘內加入質粒，否則會影響轉化效率。

2.混入質粒時應輕柔操作。

3.轉化高濃度的質?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。